El cáncer de cuello uterino es una de las formas más comunes de cáncer en mujeres a nivel mundial y su desarrollo es un proceso multifactorial; sin embargo, los virus del papiloma humano (VPH) de alto riesgo se han asociado con su etiología. El objetivo del presente trabajo fue determinar la prevalencia de la infección con VPH en pacientes con citología anormal que consultaron para colposcopia en la unidad intermedia de Kennedy de la ciudad de Pereira. Se estudiaron 129 pacientes en el período Mayo-Noviembre de 2005 a las cuales se les tomó citología con citocepillo y se realizó extracción de ADN con el material obtenido. Se obtuvo ADN en las muestras de 123 pacientes, procediéndose entonces a realizar la detección del ADN viral mediante PCR con los primers GP5+/GP6+ y con la PCR anidada que emplea los primers MY09/11 y GP5+/GP6+. Bajo nuestras condiciones experimentales, la PCR anidada detectó un mayor número de infecciones por VPH que la PCR convencional. La prevalencia de la infección según diagnóstico citológico fue de 59.2% para ASCUS, 66.1% para LBG y 87.5% para LAG. La prevalencia global de la infección fue de 63.4%, con predominio significante en mujeres con edades entre 15 y 34 años (p menor 0.05). En conclusión, los resultados muestran una prevalencia de infección por VPH similar a la observada en otros países en pacientes con citología anormal. Este es el primer estudio de su tipo realizado en Pereira y el eje cafetero.