El propósito del presente texto es aportar algunoselementos de reflexión nuevos, no incluidos en lademanda (Anexo 1) y aclarar otros ya aportados, con la(muy modesta) esperanza que sirva para vislumbrar locomplicado que puede resultar declarar inconstitucionalesel Artículo 5º de la Ley 73 de 1985 y el Artículo 1º de laLey 576 de 2000 y de paso para invitar a la sana discusióny al debate.

ResumenLas diferencias sexuales en tamaño y morfología son comunes en el reino animal y se han explicado principalmentepor la selección sexual. De acuerdo con la teoría clásica de la determinación y diferenciación sexual, las diferencias morfológicas entre individuos de la misma especie pero de diferente sexo se empiezan a manifestar poco después ycomo consecuencia de la formación y desarrollo de las gónadas. No obstante, evidencia creciente coincide en señalarque las diferencias entre machos y hembras se comienzan a manifestar mucho antes de la formación de las gónadas,desde el estado preimplantatorio (semana 1) e inclusive desde el estado cigótico (día 1). Diferencias en la cinética dedesarrollo y en el metabolismo energético preimplantatorio han sido explicadas por diferencias genéticas y epigenéticasque les subyacen y que de persistir pueden llegar hasta afectar la normal proporción de los sexos. En la presente revisiónsobre el dimorfismo sexual de embriones preimplantatorios se exploran las hipótesis, las evidencias acumuladas, losescenarios (in vivo e in vitro) y, a la luz de los últimos hallazgos, los posibles cambios que deberá enfrentar la embriología.AbstractSexual differences in size and morphology are common in the animal kingdom and they have been mainly explainedby sexual selection. According to classic theory of sexual determination and differentiation, the morphologicdifferences between the same specie individuals both different sex starts to show up soon after and as a consequenceof the gonads formation and development. However, increasing evidence coincide in signaling that differencesbetween males and females star to be evident long before of gonads formation, from preimplantatory stadium (week1) or even from zygotic stadium (day 1). Differences in kinetics of development and in energetic preimplantatorymetabolism have been explained by genetic and epigenetic differences which underlie it and, in the case of getpersistent, they can take them until disrupting the normal sex ratio. In this review about sexual dimorphism inpreimplantatory embryos hypothesis, accumulated evidences and scenarios (in vivo e in vitro) are explored, as wellas the last findings and possible changes that will have to be faced by the embryology.Dimorfismo sexual e desvio na proporção dos sexos em embriõespré-implantatoriosResumoAs diferenças sexuais no tamanho e morfologia são comuns no reino animal e foi explicado principalmente pelaseleção sexual. De acordo com a teoria clássica da determinação e diferencia sexual, as diferencias morfológicasentre indivíduos da mesma espécie, porém de diferente sexo começam a manifestar pouco depois e comoconsequência da formação e desenvolvimento das gônadas. Contudo, evidencia crescente coincide em assinalar queas diferenças entre machos e fêmeas começam a se manifestar muito antes da formação das gônadas, desde o estadopreimplantatorio (semana 1) e inclusive desde o estado cigótico (dia 1). Diferenças na cinética de desenvolvimento eno metabolismo energético preimplantatorio foram explicadas por diferenças genéticas e epigenêticas que lhes segueme que de persistir podem chegar até em afetar a normal proporção dos sexos. Na presente revisão sobre o dimorfismosexual de embriões preimplantatorios são exploradas as seguintes hipóteses, as evidencias acumuladas, os cenários(in vivo e in vitro) e, à luz dos últimos descobrimentos, as possíveis mudanças que deverá enfrentar a embriologia.

El objetivo de este estudio fue determinar si la integridad de la membrana plasmática y el ADN de los espermatozoides pueden ser afectados por la centrifugación realizada en el proceso de lavado y selección. Los espermatozoides fueron sometidos a diferentes tiempos de centrifugación (10, 30 y 45 min); se utilizó un control negativo con espermatozoides no centrifugados y un control positivo con espermatozoides sometidos a estrés oxidativo con peroxido de hidrógeno (H2O2) (200 µM). Para evaluar la integridad de la membrana se utilizó la prueba hipoosmótica (HOST) y para evaluar la fragmentación del ADN se utilizó el ensayo cometa: El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de Fisher. La centrifugación durante 10, 30 y 45 min, presentó un efecto estadísticamente significativo sobre el daño en el ADN, respecto de los espermatozoides no centrifugados (p‹0.05). Además, se observó diferencia estadística significa (p‹0.05) entre los espermatozoides centrifugados a diferentes tiempos con respecto al control positivo realizado con H2O2 (200 µM). La comparación de medias no indicó diferencia estadística significativa entre los espermatozoides no centrifugados y los centrifugados por un periodo de 10 y 30 min (p‹0.05) en la reacción positiva a la prueba HOST, lo cual sí sucedió (p‹0.05) al comparar los no centrifugados y los centrifugados por 45 min. El control positivo realizado con H2O2 presentó diferencia significativa (p‹0.05) con el resto de los tratamientos. En conclusión, los resultados del presente trabajo sugieren que la centrifugación de los espermatozoides durante 10, 30 ó 45 min a 700 x g para la realización del gradiente diferencial de Percoll, tiene un efecto deletéreo sobre el ADN de los espermatozoides bovinos y que la centrifugación por 45 min además de causar daño en el ADN produce pérdida de la integridad de la membrana plasmática.Palabras clave: espermatozoides bovinos, fragmentación de ADN, integridad de la membrana SummaryThe aim of this study was to evaluate the effects of different times of centrifugation on plasma membrane integrity and DNA of bovine sperm cells, by means of the hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. The sperm cells were centrifuged at 700 x g for 10, 30 or 45 min. No-centrifuged thawed semen served as negative control whereas hydrogen peroxide (H2O2) (200 mM) treated sperm cells were used as a positive control. The results indicate that while the integrity of the plasma membrane was not affected by centrifugation, bovine sperm DNA was damaged independently of centrifugation times. Significant differences between negative control and treatments were found (p‹0.05) and in the same way, between treatments and positive control, where the damage for oxidative stress was greater. These results indicate that centrifugation could be detrimental for in vitro bovine embryo production. Additionally, some grade of DNA fragmentation in not centrifuged sperm cells (negative control) was registered, suggesting that DNA of bovine sperm cells could be affected by other factors, probably freezing procedure.Key words: bovine spermatozoa, DNA fragmentation, membrane integrity ResumoO objetivo de este estudo foi determinar se a integridade da membrana plasmática e o DNA dos espermatozóides podem ser afetados pela centrifugação realizada no processo de lavado e seleção. Os espermatozóides foram submetidos a diferentes tempos de centrifugação (10, 30 e 45 min); foi utilizado um controle negativo com espermatozóides não centrifugados e um controle positivo com espermatozóides submetidos a estresse oxidativo com peróxido de hidrogênio (H2O2) (200 µM). Para avaliar a integridade da membrana foi utilizado o teste hipoosmótica (HOST) e para avaliar a fragmentação do DNA Fo utilizado o ensaio cometa: A análise estatística se realizou mediante o teste de Fisher. A centrifugação durante 10, 30 e 45 min, apresentou um efeito estatisticamente significativo sobre o dano no DNA, em relação aos espermatozóides não centrifugados (p‹0.05). Além disto, observou-se diferença estatisticamente significativa (p‹0.05) entre os espermatozóides centrifugados a diferentes tempos em relação ao controle positivo realizado com H2O2 (200 µM). A comparação de medias não detectou diferença estatisticamente significativa entre os espermatozóides não centrifugados e os centrifugados por um período de 10 e 30 min (p‹0.05) na reação positiva à prova HOST, o qual ocorreu ao comparar os não centrifugados e os centrifugados por 45 min (p‹0,05). O controle positivo realizado com H2O2 apresentou diferença significativa (p‹0.05) quando comparado contra os outros tratamentos. Em conclusão, os resultados do presente trabalho sugerem que a centrifugação dos espermatozóides durante 10, 30 ou 45 min a 700 x g para realização do gradiente diferencial de percoll, têm um efeito deletério sobre o DNA dos espermatozóides bovinos e que a centrifugação por 45 min além de causar dano no DNA produz perda da integridade da membrana plasmática.Palavras chave: espermatozóides bovinos, fragmentação do DNA, integridade da membrana

La utilización de semen sexado en la producción bovina posee un sinnúmero de ventajas. La combinación de la producción in vitro de embriones (PIV) con semen sexado permite ser más eficiente en la utilización de este material de alto costo económico con respecto a la inseminación artifi cial, cuando se utiliza semen sexado disminuyen las tasas de fecundación in vitro (FIV) y desarrollo embrionario. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto de la centrifugación sobre la membrana plasmática y el ADN de semen bovino sexado a través de la prueba del test hiposmótico (HOST) y el ensayo cometa,  respectivamente. Tres tratamientos fueron usados; 1) espermatozoides sin centrifugar 2) espermatozoides lavados y seleccionados mediante percoll, un método que utiliza la centrifugación y 3) control positivo, espermatozoides sometidos a estrés oxidativo con H2O2 a una concentración fi nal de 200 μM. Se observó que no hay diferencia (p mayor que 0.05) entre el tratamiento 1 y 2. Pero si se observa una diferencia (p menor que 0.05) entre el semen centrifugado y no centrifugado con respecto al control positivo. Igualmente sucede con la integridad del ADN. En conclusión, la técnica de preparación a través de percoll no altera la integridad de la membrana plasmática ni el ADN bajo ciertas condiciones, por lo que se sugiere la utilización de este protocolo para la preparación espermática previo a la fertilización in vitro al no tener efectos deletéreos sobre la membrana plasmática y el ADN. Sin embargo, se sugiere evaluar las tasas de clivaje y blastocistos producidos utilizando dicho protocolo. AbstractThe use of sex-sorted semen in cattle production has many advantages. The use of in vitro embryo production (IVP) with sex-sorted semen allow a more effi cient use of this high economic cost material on artifi cial insemination, using sexed semen on in vitro fertilization (IVF) rates and embryonic development decreased. The objetive of this study is to evaluate the effect of centrifugation on the plasma membrane and DNA of bovine sex-sorted semen through hyposmotic test (HOST) and the comet assay, respectively. Three treatments were used: 1) sperm non centrifuged 2) sperm washed and selected by percoll, using centrifugation and 3) positive control, sperm subjected to oxidative stress with H2O2 to a fi nal concentration of 200 μM. It was noted that there is not difference (p greater than 0.05) between treatment 1 and 2. But there is difference (p less than 0.05) between semen centrifuged and non centrifuged respect to the positive control. Same applies to the integrity of DNA. In conclusion, Percoll does not alter the plasma membrane integrity or DNA under certain conditions, it is suggested the use of this protocol for sperm preparation prior to in vitro fertilization, because I has not deleterious effects on the plasma membrane and DNA. However, it is suggested to evaluate the cleavage and blastocyst produced rates using this protocol.  

“La ganadería es un mal necesario”, frase que, aunque pasó a la historia como una anotación de Antoine Lavoisier en su memoria De la richesse territoriale du royaume de France, presentada ante la Asamblea Nacional Constituyente en 1791, correspondía al sentir general de los agricultores franceses de la época.http://dx.doi.org/10.21615/cesmvz.11.3.0

Es innegable que Colombia necesita de todo un ejército de profesionales pecuarios para efectos de rescatar ese subsector productivo tecnológicamente encallado en el siglo XX y que amenaza con naufragar.No obstante su debilitada y decadente representatividad política y socio-económica, su baja productividad, su rezago tecnológico, su deficiente infraestructura, su pobreza y la indiferencia estatal,  al sector pecuario de la Colombia de hoy no le queda otra opción diferente a la de, por un lado, tratar de seguir satisfaciendo la creciente y exigente demanda doméstica de alimentos de origen animal mientras que, por el otro, le hace frente a los retos asumidos como país en el marco de las políticas de la desigualdad de los tratados de libre comercio y cuyas exigentes cotas amenazan con superarnos, aplastarnos y finalmente someternos aún más socioeconómica, científica y tecnológicamente ante los más “competitivos”.

El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilización in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitió la centrifugación de los espermatozoides para los procesos de lavado y selección espermática. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo más pequeño (pozos internos) de aproximadamente 50 µl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de diámetro). El procedimiento consistió en llenar los pozos interno y externo con 700 µl de medio de fertilización, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30 µl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Después de una hora se removió todo el contenido del pozo externo y se dejó el contenido del pozo interno con el medio y las células germinales por un periodo de incubación de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete días con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizó un gradiente de Percoll 45-90% para la selección espermática. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporción de ovocitos que llegaron al estadio de morúla y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodológica son similares a los obtenidos con la metodología convencional (p<0.05). Estos resultados indican que ambos métodos producen resultados similares pero la nueva propuesta metodológica permite ahorrar tiempo, es menos laboriosa, consume menos reactivos y permite reducir la manipulación de las células espermáticas con buenos efectos eventuales en el mejoramiento de los procedimientos de reproducción in vitro.