La importancia de bacterias acido lácticas (BAL), como los Lactobacillus sp. en Colombia y en el mundo, hace necesario encontrar métodos óptimos para su crecimiento, utilizando sustratos diferentes para su desarrollo. Se empleó melaza de ca?a como sustrato iniciador para el incremento de L. plantarum. Se evaluaron condiciones y variables que afectan el crecimiento microbiano. Se manejó como cepa control; L. plantarum; WS417 y se inocularon diferentes concentraciones de melaza estéril a diferentes valores de pH, temperatura y agitación. El crecimiento, se determinó con microbiología tradicional utilizando recuentos directos en placa, con agar MRS. La interpretación de resultados, se realizó con un análisis de varianza factorial, observando interacciones de las variables, respecto al recuento microbiológico. Las condiciones óptimas para el crecimiento de L. plantarum; fueron 20% concentración, 30±1°C durante 24 horas, 5,2±0,1 (pH) y 100rpm, donde se obtuvo un recuento de 43x109UFC/mL. Se concluyó que la melaza de ca?a podría ser usada como sustrato para el desarrollo de Lactobacillus sp.